细菌AN19-12菌株的杀线虫活性测定及其分类鉴定毕业论文

 2021-04-20 11:04

摘 要

本研究对前期从松材线虫体表分离筛选获得1株具有杀线虫活性的菌株AN19-12的杀线活性进行了研究,并对其分类地位进行了鉴定。结果表明,该菌株具有一定杀线虫活性,其杀线虫活性物质主要存在于菌液的上清液中并且具有一定的热稳定性。与线虫互作12 h,1d、2d、3d发酵液的杀线活性依次增加,原液杀线率分别为72.66%,78.69%,83.73%。随着与线虫作用时间的延长,杀线率提高,1d、2d、3d发酵原液与线虫互作24 h的杀死率均达100%,但随着菌液浓度的减小杀线活性显著降低。试验从细菌的简单染色对细菌的基本形态结构进行了观察,发现该菌为革兰氏阴性菌,短杆状,没有芽孢但是具有单端多生鞭毛,结合9种不同的生理生化反应结果,初步推断该菌属于假单胞菌科(Pseudomonadaceae)。

关键词:细菌,松材线虫,杀线活性,生物防治

Bacteria AN19-12 strains kill nematodes activity determination and its classification and identification

Abstract:The research on the early days of pine wood nematode isolation from body surface obtained 1 lines with nematicidal activity of strain AN19-12 of nematicidal activity was studied, and the taxonomic status of identification.The results show that the strain has certain kill nematodes activity, its kill nematodes active substances mainly exist in the bacterium fluid on the clear liquid and has good thermal stability. And nematodes interactions 12 h, 1 d, 2 d, 3 d fermented liquid kill line of active in turn increase prefiltration and kill line rate were 72.66%,78.69%,83.73%. As with nematodes role the extension of time, improve the rate of kill line, 1 d, 2 d, 3 d fermentation yuanye and interaction of nematode 24 h kill rate reached 100%, but with the decrease of the bacteria liquid concentration kill line activity significantly reduced. Test from bacteria to the simple dyeing bacteria are observed basic morphological structure, and found that the bacteria for of gram-negative bacteria, short lever, no spores, but with single end to have more flagellum, combined with nine different physiological and biochemical reaction result, preliminary infer that the bacterium pseudomonas belongs to the family (Pseudomonadaceae).

Keywords: bacteria Bursaphelenchus xylophilus nematicidal activity

Biological control

目录

1前言 1

1.1松材线虫病的危害特点 1

1.2松树萎蔫病的防治措施 2

1.2.1 化学防治措施 2

1.2.2物理防治措施 3

1.2.3生物防治措施 3

1.2.3.1生防植物 3

1.2.3.2生防真菌 4

1.2.3.3生防放线菌 4

1.2.3.4生防螨类 5

1.2.3.5生防细菌 5

1.3本研究的目的和意义 6

2材料与方法 7

2.1供试材料 7

2.2方法 7

2.2.1细菌AN19-12菌株的培养 7

2.2.1.1 NA培养基的制备 7

2.2.1.2 AN19-12菌株的活化方法 7

2.2.2细菌AN19-12菌株的染色方法和细菌细胞形态的观察 8

2.2.2.1革兰氏染色 8

2.2.2.2芽孢染色 8

2.2.2.3鞭毛染色 8

2.2.3细菌AN19-12菌株的生理生化特征测定 9

2.2.3.1培养基的制备 9

2.2.3.2生理生化特征测定 9

2.2.4人工饲养无菌松材线虫 11

2.2.4.1 PDA-真菌平板的制备 11

2.2.4.3无菌松材线虫的培养与分离 11

2.2.5细菌与松材线虫的互作 12

2.2.5.1细菌发酵液的制备 12

2.2.5.2 AN19-12杀线虫活性测定 12

3结果与分析 13

3.1细菌AN19-12菌株的染色结果 13

3.1.1 革兰氏染色 13

3.1.2 芽孢染色 14

3.1.3 鞭毛染色 15

3.2细菌AN19-12菌株的生理生化 16

3.3 细菌与无菌松材线虫的互作结果 19

4.结论与讨论 20

参考文献 22

1前言

松材线虫病又称松树萎蔫病。是由松材线虫寄生在松树体内所引起的一种毁灭性病害,具有致病性强,传播速度快、除治难度大、跳跃式发生等特点,被称为松树的"癌症",是不冒烟的森林火灾,被国家列为头号检疫对象。对我国生态区域构成了严重威胁,防控工作正面临着前所未有的严峻挑战。我国自1982年在南京紫金山林区首次发现该病,到发生该病后的10年间,发生面积约达38000hm2,造成松树死亡1400000株以上,损失木材50000m3。用于病害的防治经费亦达645万元。它不仅给国民经济造成巨大损失,也破坏了自然景观及生态环境,对我国丰富的松林资源构成严重威胁。疫情现已逐渐扩大到全国17 个省(区),是我国最具危险性的森林病虫害[1-2]

1.1松材线虫病的危害特点

首先松材线虫病对松树具有死亡速度快的特点,该病一般在病原线虫侵染松树体内后的半个月至一个月即可出现针叶萎蔫变色的外部症状,外部症状出现后约一个月至一个半月即可死亡。

其次,松材线虫病的传播途径多,松材线虫可以由多种媒介昆虫进行传播,也可随病木及制品的调运远距传播。这些病木或其制品作为侵染源,一旦传播开来,可很快形成新的发病中心。

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