摘 要

传递细胞是具有细胞壁内突特殊结构的细胞，其有效地增加了细胞吸收、分泌与外界交换的面积。根瘤菌与豆科植物互作后能引起豆科植物传递细胞的产生，研究分析传递细胞的分化机制极有必要。当前通过对玉米胚乳的研究，已表明MRP-1作为传递细胞中特异性蛋白表达的转录因子具有一定的普遍性,该蛋白包含MYB-相关DNA 结合域，这些DNA 结合域被鉴定为属于SHAQK(Y/F)亚家族的DNA 结合蛋白。本实验通过检测MRP-1在根瘤菌与刺槐互作后的传递细胞中是否表达来了解该种类型传递细胞的分化机制。实验以刺槐根部提出的RNA反转录所得的cDNA为模板，通过同源序列比对，设计引物，PCR克隆后，在琼脂糖凝胶电泳上获得相应长度的同源性条带，将此条带割胶回收后，测序，上网比对，初步说明了刺槐根表层传递细胞的分化也同样由该类基因参与。为进一步获取该转录因子的全长基因打下了基础。

关键词：刺槐；传递细胞；mRNA；PCR检测

Extracting mRNA from Robinia Pseudocacia And Detection of Specific Transcription Factor

Abstract: Transfer cells are a class of cells,whose internal bulge. Their existence effectively increase the area of the cell absorption, secretion and material exchange with the outside. The interaction of rhizobia with leguminosea can help the leguminosea to form transfer cells. Thus, analysing the differential mechanism of transfer cell is very necessary. Now, the studies of maize endosperm have shown that MRP-1 transcription factor as a transfer cell-specific protein has a certain universality. This protein contains MYB-related DNA binding domain, these DNA binding domain was identified that they belong to SHAQ(Y/F) sub-family of DNA binding proteins. Our subject will test whether MRP-1 of the transfer cells which come from the interaction of rhizobia with leguminosae has been expressed or not to make this type of transfer cell's differential mechanism clear. We uesd the cDNA reverse transcribed from the mRNA as the template. Through blasting the homologous sequences, we designed the premiers. After PCR cloning, if we can get homology stripe in the AGE(agarose gel electrophoresis), we will incisice the gel which would be recovered and sequenced. At last we will blast the sequences on the Internet. Through all these, we can primarily conclude that the surface transfer cell's differentiation of Robinia Pseudocacia is related with this type of genes. All of the above would make a significant foundation for gaining overall gene later.

Keywords: Ribonia pseudocacia; transfer cell; mRNA; PCR detection

目录

1 前言 1

1.1 文献综述 1

1.1.1传递细胞 1

1.1.2 结瘤因子 1

1.1.3MYB转录因子 2

1.2 国内外研究现状 3

1.3 研究的目的和意义 3

2正文 4

2.1 材料和方法 4

2.1.1实验材料 4

2.1.2 无菌苗以及根瘤菌的培养 5

2.1.3 接菌和水培 6

2.1.4 显微观察 6

2.1.5 刺槐根部总RNA的提取 6

2.1.6 PCR引物设计以及PCR扩增 7

2.1.7 割胶提纯 10

2.2 结果与分析 11

2.2.1 刺槐根毛显微观察结果 11

2.2.2 PCR电泳结果 13

2.2.3测序结果 15

2.3 讨论 15

3 致谢 17

参考文献： 18

1 前言

1.1 文献综述

1.1.1传递细胞

传递细胞是一种特化的薄壁组织细胞。它是通过电子显微镜发现于二十世纪六十年代。其细胞壁向胞腔内突，形成许多指状或鹿角状的不规则突起，使质膜的表面积增加，并且富有胞间连丝，有利于物质的运送和传递^[1]。

1.1.1.1 传递细胞的分布

在植物体内，传递细胞一般位于多溶质的部位，这些部位往往存在较密集的溶质短距离运输。所以传递细胞被称为叶肉细胞与输导组织物质运输的桥梁。分布位置例如小叶脉的输导分子周围，茎节、子叶节和花序轴节部的维管组织中，某些植物子叶的表皮，胚乳的内层细胞等处都有传递细胞的分布；在有分泌功能的各种细胞中，也发现有传递细胞的存在^[1]。

1.1.1.2 传递细胞的类型

B.E.S.Canning和J.S.Pate将小叶脉中传递细胞所在的部位，以及细胞中内脊分布的情况，分为4种类型：①A型细胞，在整个细胞周围的细胞壁都有内突生长，人们认为它是特化的伴胞；②B型细胞，在筛分子或A型细胞紧靠的细胞壁部分，它的内突生长最为发达，被认为是一种特化的韧皮部薄壁组织细胞；③C型细胞，被认为是特化的木质部薄壁组织细胞；④D型细胞，作为木质部分界的维管束鞘细胞^[1]。C型与D型一般只限于与管状分子直接接触的部分。目前还发现了其他类型的传递细胞。在各种植物中，传递细胞的细胞壁内突形式并不一致，有的为线状结构，或“Y”型突起，或者突起较短，成乳突状^[1]。总体而言，传递细胞的壁结构比较多样，即使是同一植物中的传递细胞，它的细胞壁结构也可能不同。

1.1.2 结瘤因子

结瘤因子(Nod factor）又称根瘤菌结瘤因子（Rhizobium nod factor）,由根瘤菌与豆科植物互作产生。 Rhizobium、Bradyrhizobium和Azorhizobium等三属的细菌能感染豆科植物并形成根瘤，它能以极低的浓度使宿主植物出现根毛分枝、弯曲等相变现象（Root-hair deformation, 简称Had）^[2]。

1.1.2.1 结瘤因子的作用机理