摘 要

神经细胞原代培养对研究细胞形态、细胞功能及电生理特性和神经药物学等具有重要作用。本试验主要研究了胰蛋白酶、胶原酶以及两种酶的混合酶对大鼠脊髓神经元细胞离体培养中部分生理特征的影响。通过对脊髓神经元细胞的生长情况，比较这三种消化酶在大鼠脊髓神经元原代培养中的特点。试验结果表明，单一使用胰蛋白酶，细胞数量少，纯度低，细胞能存活的时间长；单一使用胶原酶，细胞数量少，纯度低，细胞存活时间短；使用混合酶消化，细胞数量多，纯度高，细胞存活时间最短。

关键词：大鼠；脊髓；神经元；细胞培养

Different enzyme treatment of the primary cells of the rat spinal cord neurons

Abstract: Neurons cell cultivation was important for the study of cell morphology and function, electrophysiology character, nerve pharmacology et al. This research mainly considered the effects of trypsin, collagenase, and the mixture of these two enzymes to some physiological characteristics in vitro culture of rat neurons cell. The characters of these three enzymes to rat neurons cell culture were compared by the growth situation of the neurons cell. The results showed that the single-function of trypsin showed as small number cells, low purity and long survive time of culture cells; single-function of collagenase showed as small number cells, high purity and a general survival time of culture cells; the using of the mixed enzyme showed as a larger number of cells, high purity, but a shorter cells survival time.

Keywords: rat; spinal cord; neurons; cell culture

前言 1

1.文献综述 2

1.1神经元基本概念及分类 2

1.2神经元的原代细胞培养方法 3

1.3大鼠脊髓神经元的基本形态 4

1.4研究神经元的意义 4

1.5 胰蛋白酶与胶原酶的性质 4

2.材料与方法 6

2.1实验动物 6

2.2实验药品 6

2.3实验方法 6

2.3.1 A组单一胰酶消化： 6

2.3.2 B组单一胶原酶消化： 7

2.3.3 C组混合酶消化： 7

3.结果与分析 8

3.1结果 8

3.1.1 A组胰蛋白酶消化所得细胞生长特点： 8

3.1.2 B组胶原酶消化所得细胞生长特点： 8

3.1.3 C组混合酶消化所得细胞生长特点： 8

3.2 结果分析 9

4.结论与讨论 13

4.1结论 13

4.2讨论 13

5.参考文献 14

前言

神经元，又称神经组织，是构成神经系统结构和功能的基本单位。神经细胞是构成神经系统的基本结构和功能单位。虽然由于所处的脑区功能不同， 高等动物和低等动物神经系统的复杂程度不一，但构成神经组织的基本单位却是非常相似。当从胚胎中分离出神经元细胞时，由于它们在原位组织中完成了分裂和分化，原代培养的神经元细胞将不会分裂、增殖。目前已经涌现出了许多原代神经元培养的实验方法。

神经细胞原代培养对研究细胞形态、 细胞功能及电生理特性和神经药物学等具有重要作用。其中脊髓神经元细胞体外培养适合应用于神经元形态学、生化、遗传、药理等学科的研究，特别是药物对脊髓损伤的保护作用和中枢神经损伤的分子机制等方面的研究。

神经细胞离体培养是研究神经生理、神经病理、神经发育与再生以及神经营养因子的常用研究手段，但神经元作为一种高度分化的细胞，形态上有胞体、突起之分，对理化因素的影响十分敏感，相对于机体的其它细胞，在体外难以存活和生长，培养条件要求苛刻。脊髓组织原代培养很难培养到单一类型的神经元，加之神经元很脆弱，尤其是运动神经元，体积大、耐受极差，不便采用流式细胞进行淘选，故研究培养细胞中的最佳方案尤为重要，以提高细胞的产量纯度活力。

笔者本次试验主要是对大鼠脊髓神经元细胞从组织中分离所使用的消化酶进行比较，研究几组消化酶消化大鼠脊髓神经元组织的优点与缺点。笔者将采用控制变量、多组平行等方法，用不同的消化方法来培养大鼠脊髓神经元，从而比较各种方法的优劣。

1.文献综述

1.1神经元基本概念及分类

神经元，又称神经组织，是构成神经系统结构和功能的基本单位。神经细胞是构成神经系统的基本结构和功能单位。虽然由于所处的脑区功能不同， 高等动物和低等动物神经系统的复杂程度不一，但构成神经组织的基本单位却是非常相似。当从胚胎中分离出神经元细胞时，由于它们在原位组织中完成了分裂和分化，原代培养的神经元细胞将不会分裂、增殖。

神经元和神经胶质细胞构成脑内高度复杂的神经元和神经胶质细胞网络。人神经元的总数约为10^l0～10¹²个，神经胶质细胞数量超过其数倍，但近年也有研究显示神经元的数量与神经胶质细胞相当。

神经元细胞根据神经元突起的数目分类可分为：单极神经元（unipolar neuron 胞体只有一个突起），假单极神经元（pseudounipolar neuron从胞体发出一个突起,在离胞体不远处呈T型分为两支），双极神经元（bipolar neuron从胞体两端各发出一个突起，一个是树突，另一个是轴突），多极神经元（multipolar neuron有一个轴突和多个树突）（图1.1）。脊髓神经元属于双极神经元，双极神经元是人体中一种重要的神经元，研究脊髓神经元是研究双极神经元的重要手段之一。

根据神经元的功能，可将其分为三种，感觉神经元（afferent neuron传导感觉冲动），运动神经元(motor neuron传导运动冲动），中间神经元（interneuron在神经元之间起联络作用），脊髓神经元属于中间神经元，脊髓神经元是典型的中间神经元，培养研究脊髓神经元对探究中间神经元形态、功能有着重要的作用。

图1.1